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技術支援

染色液使用時需要注意哪些要點↟│↟✘?
釋出時間₪✘:2022-10-20   點選次數₪✘:240次
  染色液是一種間接的不含生物素的系統↟↟,用於檢測鼠抗IgG▩╃、IgM和兔源性一抗▩••◕▩。對常規經福爾馬林固定↟↟,石蠟包埋的組織和冰凍組織切片中的靶抗原進行檢測▩••◕▩。
 
  染色液的使用方法₪✘:
 
  1.DAB顯色液配製
 
  10mMTris-HCl(pH7.6)9mL+DAB(diaminobezidin3↟↟,3-二氨基聯苯胺)+0.3%(W/V)NiCl2或CoCl21mL,顯色時加入5-10mL30%H2O2混勻後立即使用▩••◕▩。
 
  2.顯色
 
  準備好含有待測蛋白的固相膜₪✘:包括電泳▩╃、轉印▩╃、封阻▩╃、一抗(或生物素)處理▩╃、辣根過氧化酶(HRP)標記的二抗(或鏈黴親和素)處理▩╃、清洗等步驟▩••◕▩。
 
  3.加入適量的DAB顯色液↟↟,鋪滿整個固相膜表面(可按比例增減)▩••◕▩。
 
  4.置於平式搖盪儀上↟↟,在室溫下孵育2至5分鐘↟↟,避免光照(暗室操作)↟↟,直至棕褐色沉澱出現▩••◕▩。
 
  5.用鑷子夾起固相膜↟↟,放進無離子水裡清洗▩••◕▩。
 
  6.空氣中晾乾▩••◕▩。
 
  7.拍照記錄▩••◕▩。
 
  染色液的使用注意事項₪✘:
 
  1.DAB有潛在致突變作用↟↟,操作時應注意穿戴好防護用具▩••◕▩。
 
  2.DAB溶液應低溫密封儲存▩••◕▩。如有結晶析出↟↟,應確保結晶*溶解再行使用;
 
  3.顯色工作液應現用現配↟↟,新鮮配製的工作液應為無色或淺棕色↟↟,如顏色過深↟↟,請勿使用;
 
  4.DAB在常溫下不穩定↟↟,每次取用後均應及時加蓋密封放回冰箱↟↟,以免因DAB分解影響實驗↟↟,或因滲漏造成實驗環境汙染▩••◕▩。

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